Indiana Jones kontaktas av konsthandlaren Walter Donovan. Som ber honom att leta rätt på den heliga graal sedan Jones pappa försvunnit spårlöst medan han var den på spåren. Jones beger sig till Italien efter att ha fått sin pappas dagbok. Där blir han och den österrikiska konstprofessorn dr Elsa Schneider angripna av agenter från en mystisk organisation.